ترجمه گسترش استفاده از فلورسنت در پروتوکل وضعیت هیبریداسیون برای تشخیص و شمارش سریع لیستریا مونوکسیدوژن در شیر

توضیحات

 عنوان فارسی:گسترش استفاده از فلورسنت در پروتوکل وضعیت هیبریداسیون برای تشخیص و شمارش سریع لیستریا مونوکسیدوژن در شیر

عنوان انگلیسی مقاله ترجمه شده:

detection and enumeration of Listeria monocytogenes in milk

گسترش استفاده از فلورسنت در پروتوکل وضعیت هیبریداسیون برای تشخیص و شمارش سریع لیستریا مونوکسیدوژن در شیر

خلاصه

یک متد سریع برای شناسایی و شمارش لیستریا مونوکسیدوژن در شیر گسترش پیدا کرده است.این متد بر اساس فلورسنت در وضعیت هیبریداسیون(FISH) و استفاده از پراب های 19 مر الیگونوکلئوتیدی فلورسنتی و هومولوگ های 16S rRNA ال مونو سیتوژن و برگرفته از تکنیک هیبدریداسیون نقطه ای می باشد(وانگ و همکاران 1991). این پروتوکول بر اساس هبیریداسیون 68 نمونه پایه بنا شده است و بر روی 114 نمونه کشت شده از لیستریا که از مواد خوراکی و نمونه های محیطی دور به دست آمده اند، آزمایش شده است که این لیستریا شامل موارد زیر می شود: مونوسیتوژن،اینوکوا،ایوانووی،گرایی،سیلیگریو ولشیمری. پراب مخصوصای نسبت به تمام سروولوژِی های لیستریا مونوکسیدوژن ها هیبریداسیون گردید و هیچگونه هیبریداسیون متقابلی در این نمونه ها و نمونه های دیگر مشاهده نگرددید. سپس پروتکل در جهت تشخیص مستقیم مونوکسیدوژن ها در نمونه های شیر مصنوعی و طبیعی  مورد استفاده قرار گرفت و ارتباط روش تزریق نمونه سنتی و  روش شمارش FISH مورد بررسی قرار گرفت. نتایج نشان می دهد که روش FISH روشی امیدوارکننده برای تشخیص سریع و شمارش مونوکسیدوژن ها در نمونه های غذایی و محیطی است که به ما اجازه می دهد در مدت هفت ساعت تشخیص مثبتی داشته باشیم و هزینه ی آن نیز با توجه به تعداد نمونه ها بین  0.45 تا 3.0 یورو می باشد.

معرفی

لیستریا مونوکسیدوژن یک پاتوژن حاصل از غذا می باشد که می تواند باعث بروز و شیوع بیماری های ویروسی شود. این میکرو ارگانیسم  از دهه ی هشتاد میلادی در گستره ی وسیعی از مواد غذایی در بسیاری از کشورها باعث ایجاد بیماری های حاصل از خوراک گشته است(سادرلند و پوریت 1997). در 1997 شیوع بیماری در سطح جهان دو تا پنج مورد در هر یک میلیون نفر بوده است(راکورت و کوزارت 1997) و اگرچه عفونت با کمک آنتی بیوتیک ها کاملاٌ از بین میرود اما 20 الی 40 درصد موارد منجر به مرگ می گردد(مک لوکلین 1996). اخیراٌ در ابالات متحده آمریکا لیستریوزیس به عنوان دومین علت مرگ و میر ناشی از بیماری های غذایی شناخته شده است(مید و همکاران 1999) که توجیه کننده ادامه تجزیه و تحلیل میکروارگانیزم های ایجاد کننده مونوکسیدوژن ها می باشد.

توسعه روش های سریع تشخیص مونوکسیدوژن ها در غذا برای اطمینان از مواد غذایی حیاتی می باشد. روش های تزریقی قدیمی به خوبی بنیان گذاری شده اند اما پیچیده و زمان بر می باشند. آن ها به تکمیل شدن خالص کشت های میکروبی بستگی دارند و شامل مراحل طولانی پیش از غنی سازی، غنی سازی انتخاب و شناسایی می باشند. برای شناسایی مونوکسیدوژن ها نتایج مثبت پس از 5 روز به دست می آید. پیشرفت های علمی در سال های اخیر منجر به توسعه روش های سریع تر، حساس تر و ویژه تر برای شناسایی میکرو ارگانیزم های بیماریزا گشته است. این روش ها شامل تکنیک های ایمنی بدن،کیت های بیوشیمیایی(اولسن و همکاران 1995) و تکنیک های مولکولی مانند PCR (جیتون و همکاران 1992، لانتز و همکاران 1994،وانگ و همکاران 1997، اینجیانی و همکاران 2001) و روش FISH نیاز به کشت خالص را از بین می برند و نتایج را در مدت 3 الی 8 ساعت به دست می آورند.

تکنیک FISH در حال حاضر برای بررسی های کلینیکی از مدفوع(اسگیر و همکاران 2000) ادرار و خون و تجزیه تحلیل های میکرو بیلوژیکی آب(کنزاکا و همکاران 1998) خاک و لجن فعال(واگنر و همکاران 1994) و بیوفیلم ها (پولسن و همراهان 1993) بر پایه ی هیبربداسیون توالی های خاص ژنومی میکرو ارگانیسم ها با یک پراب نشان گذاری شده فلورسنت می باشد. این کار معمولاٌ شامل چهار مرحله می باشد: فیکس کردن نمونه و اجازه دادن به گذر نمونه ها،هیبریداسیون توالی هدف و پراب فلورسنت، شستشوی شدید و شناسایی سلول های هیبرید شده( امان و همکاران 2001).

هدف از این مطالعه توسعه پروتکل FISH برای تشخیص خاص لستریا مونوکسیدوژن ها در مدت زمان تقریبی هفت ساعت می باشد تا بتوان توانایی این متد را در  شناسایی و شمارش این پاتوژن ها در نمونه های غذایی ارزیابی نمود و همچنین برای ارزیابی رابطه میان روش های تزریقی سنتی و روش جدید FISH.

تثبیت کردن باکتری ها

کشت های شبانه در TSA رشد نمودند (CM0131، اکسید همپشایر انگلیس) در 1000 میکرو لیتر آب مقطر سانتریفیوژ شدند (1400 دور بر دقیقه  10 دقیقه) و دوباره واکنش دادند. گلوله های نمونه در 100 میکرو لیتر از محلول پارافرمالدئید 4% ( مرک شارپ و دوم لیسبون پرتقال) دوباره تزریق شدند. این مخلوط ها دوباره به مدت 20 دقیقه سانتریفیوژ شدند( 1400 دور بر دقیقه 10 دقیقه) و در 1000 میکرو لیتر آب مقطر دوباره پودر شدند.

توجه:

• برای دانلود فایل word کامل ترجمه از گزینه افزودن به سبد خرید بالا استفاده فرمایید.
• لینک دانلود فایل بلافاصله پس از خرید بصورت اتوماتیک برای شما ایمیل می گردد.