ترجمه استانداردسازی روش سنجش لاکتوپراکسیداز در شیر

توضیحات

 عنوان فارسی: استانداردسازی روش سنجش لاکتوپراکسیداز در شیر

Standardization of method for lactoperoxidase assay in milk

چکیده :

روش طیف سنجی  مورد استفاده برای اندازه گیری فعالیت لاکتوپراکسیداز در شیر، استانداردسازی شد. سیستم سنجش متشکل از ABTS [2،2’ – آزینوبیس – (3 اتیل benzthiazoline – 6 – اسید سولفونیک)] به عنوان بستر رنگزا، نرخ خطی اولیه ی واکنشی تا 700 میکروگرم بر لیتر غلظت لاکتوپراکسیداز را با حداکثر فعالیت در پ،هاش (pH) 0/6 ایجاد نمود. فعالیت لاکتوپراکسیداز در شیر گاومیش بالاتر از شیر گاو و غلظت مربوطه ی آنزیم به ترتیب 31 و 24 میلی گرم بر لیتر بود. اتلاف 10 تا 15 درصدی فعالیت پراکسیداز در تهیه ی پنیراب مایه ماست یا پنیراب اسید رخ داد.

کلمات کلیدی :  سنجش لاکتوپراکسیداز / شیر گاو / شیر گاومیش / پنیراب مایه ماست / پنیراب اسید.

مقدمه

لاکتوپراکسیداز (EC 1.11.1.7) آنزیمی است که در شیر، بزاق و اشک پستانداران یافت می شود. این آنزیم در شیر گونه های مختلف و در غلظت های مختلف موجود است [12]. لاکتوپراکسیداز به همراه تیوسیانات و آب اکسیژنه (هیدروژن پراکساید) بواسطه ی تسریع پراکسیداسیون تیوسیانات به یون مفروض ضد میکروبی هایپوتیوسیانات، در یک سیستم عمل می کنند [1].  ویژگی ضد میکروبی بودن لاکتوپراکسیداز، به این آنزیم کاربرد بالقوه ای در حفظ شیر خام تحت شرایط محیط می دهد [8]. روش های موجود برای برآورد فعالیت پراکسیداز بر پایه ی دهنده های مختلفی مانند p -فنیلن دی آمین [2]، پیروکالول و گایاکول [4،10]، ABTS [2،2’ – آزینوبیس – (3 اتیل benzthiazoline  – 6 –  اسید سولفونیک)]  [9، 10، 14] هستند و بنابراین مقایسه ی آنها کار دشواری است. شیمی پیچیده ی واکنش های پراکسیداسیون مستلزم آن است که شرایط تجربی به دقت طراحی و با دقت بسیار کنترل شوند تا نرخ های اولیه خطی که به طور مستقیم با غلظت پراکسیداز متناسب اند بدست آیند. در مطالعات جنبشی واکنش های کاتالیز شده ی لاکتوپراکسیداز، باردسلی [3]، غلظت 1 میلی مول بر لیتر  ABTS، غلظت 1/0 میلی مول بر لیتر آب اکسیژنه (هیدروژن پراکساید) و پ.هاش 6/5 را با دادن بالاترین نرخ اولیه و حداقل مهار خود تخریبی در طی یک دوره 2 دقیقه ای بعنوان شرایط واکنش در آزمایش مشخص کرده است. با این حال، نشان داده شده است که لاکتوپراکسیداز، سطح فعال بوده است [8]. در غلظت کم، به دلیل جذب آنزیم در سطح ظرف، که با قرار دادن ژلاتین در آزمایش می توان از آن جلوگیری بعمل آورد، کاهش قابل توجهی از فعالیت آنزیم در فاز مایع وجود دارد [10].  با این حال، در اکتساب داده ها مشکلات عملی وجود دارد چرا که تجهیزات زیادی نیاز است. بنابراین، یک سیستم سنجش ساده و مناسب، با استفاده از ABTS به عنوان بستر رنگزا، توسط دستگاه اسپکتروفتومتر استانداردسازی شده است. توزیع و سطح لاکتوپراکسیداز در شیر گاو و گاومیش با استفاده از این روش مشخص شده است.

• مواد و روش ها

2-1-  معرف ها

2-1-1-  محلول ABTS (1 میلی مول بر لیتر)

پنجاه و پنج میلی گرم ABTS (سیگما) در بافر فسفات (0.1 مول بر لیتر و پ.هاش 0/6) حل شده و حجم را به 100 میلی لیتر رساند.

2-1-2-  محلول آب اکسیژنه (هیدروژن پراکساید) (1/0 میلی مول بر لیتر)

از محلول تجاری هیدروژن پراکساید 30٪ V / V (مرک)، یک محلول ذخیره ی 100 میلی مول بر لیتر با استفاده از تیتراسیون با محلول پرمنگنات پتاسیم استاندارد، تهیه شد. محلول ذخیره بلافاصله قبل از استفاده به غلظت 2/3 میلی مول بر لیتر رقیق شد.

2-1-3-  آنزیم پراکسیداز

لاکتوپراکسیداز حاصل از شیر گاومیش به یک شاخص خلوص A₄₁₂/A₂₈₀ = 0.94، خالص شد [6]. لاکتوپراکسیداز حاصل به غلظت های مختلف از 10 تا 800 میکروگرم بر لیتر داخل بافر فسفات حاوی 1/0٪ ژلاتین () (PBSG 1/0 مول بر لیتر و پ.هاش 0/7) حل شد.

توجه:

• برای مشاهده فایل کامل ترجمه لطفا اقدام به خریدترجمه مقاله نمایید.
• پس از خرید لینک دانلود بلافاصله برایتان به صورت اتوماتیک ایمیل می گردد.