توضیحات
عنوان فارسی: استفاده از تقویت ایزوترمال حلقه واسطه (LAMP) برای تشخیص عوامل بیماری زا در آبزی پروری میگو و ماهی در فیلیپین
عنوان انگلیسی مقاله ترجمه شده:
Utilization of the loop-mediated isothermal amplification (LAMP) for the detection of pathogens in shrimp and fish aquaculture in the Philippines
کلسین یکی دیگر از واکنشهای تشخیص فلورسنت شیمیایی است که میتواند در مخلوط واکنش قبل از تکثیر استفاده شود. کلسین در ابتدا با یونهای منگنز ترکیب شده تا اثر خشك كردن حاصل شود. تقویت یونهای پری فسفات، تولید میکند که یونهای منگنز را به یکدیگر پیوند داده و آنها را از کلسین جدا میکند تا فلورسنس ایجاد نماید. فلسورسنت بیشتر تقویت میشود چون کلسین ترکیبی از یونهای منیزیم است. حضور فلورسنس نشاندهنده حضور ژن هدف و تشخیص بصری بدون باز کردن لوله است، بنابراین جلوگیری از انتقال آلودگی با محصولات پس از تشدید، میسر میشود.
روش دیگر نظارت بر آزمایش LAMP از طریق استفاده از الکتروفورز ژل آگارز است. پس از انكوباسيون در دماي 63 درجه سانتيگراد به مدت 30 دقيقه، مقادير محصولات LAMP بر روي ژل آگارز 3٪ در بافر تریسبرات الکتروفورز میشود که با اتيديوم بروميد رنگ آميزي شده و بر روي دستگاه انتقالدهنده UV نمایان میشود. در تجزیه ژل آگارز، آمینیکونهای LAMP یک الگوی مشابه نردبان را در مقایسه با یک باند واحد مشاهده میکنند که در PCR دیده میشود. این به علت ساختارهای گل کلم مانند با حلقههای چندگانه است که از طریق حرارت دادن بین تکرار متناوب معکوس هدف در همان رشته شکل گرفته است.
نظارت بر زمان واقعی تقویت LAMP را میتوان از طریق تجزیه و تحلیل اسپکتروفتومتر با استفاده از توربیمیتر واقعی انجام داد که کربن را ثبت میکند (پاریدا و همکاران، 2008). Turbidimeter در مقایسه با دستگاه PCR آنی نسبتاً ارزان است. گلآلود بودن پدیده منحصر به فرد در ارتباط با تقویت LAMP است و به کارایی تقویتی بیشتر واکنش LAMP مربوط میشود.
ویژگیهای اصلی LAMP توانایی آن در تقویت اسید نوکلئیک تحت شرایط ایزوترمال در محدوده 65 درجه سانتیگراد است. در نتیجه منجر میشود تا استفاده از تجهیزات واکنش، ساده و مقرون به صرفه باشد. هر دو فرآیند تقویت و تشخیص ژن را میتوان در یک مرحله تکمیل کرد، که این کار با روی هم قرار دادن مخلوط نمونه ژن، آغازگرها، DNA پلیمراز با فعالیت جابجایی رشته و بستر در دمای ثابت انجام میشود.
یکی دیگر از ویژگیها این است که LAMP دارای خاصیت بالا و کارایی تقویتکنندگی بالا است. در واقع LAMP مشخصات قابل قبولی دارد، زیرا این آزمایش میتواند ژن خاصی را تقویت کند و میتواند یک تفاوت نوکلئوتید را تشخیص دهد. راندمان تقویت بالا LAMP به کاهش خسارت ناشی از تغییر حرارتی به دلیل واکنش ایزوترمال آن منجر شده است. این واکنش را میتوان تحت دمای مطلوب آنزیم انجام داد و بدین ترتیب واکنش مهار در مرحله بعد تقویت کمتر در مقایسه با PCR رخ خواهد داد. مشاهده میشود وقتی که اسید نوکلئیک با روش LAMP تقویت میشود، گلآلود بودن حاصل از رسوب براساس پیشرفت واکنش تولید میشود و بنابراین برای نظارت آسان بصری از طریق چشم غیر مسلح، بسیار ایدهآل خواهد بود.
حساسیت بالا سیستم LAMP، آن را نسبت به مثبت کاذب به علت حمل و یا آلودگی متقابل حساس میکند. بنابراین افزایش و تشخیص باید در مناطق کار جداگانه انجام شود. از آنجایی که واکنشهای مثبت به عنوان اسمیر، همراه با بعضی از نوارهای وزن مولکولی کم دیده میشوند و به عنوان یک گروه تنها در PCR دیده نمیشود، خاصیت تقویت باید کاملاً مورد تایید قرار گیرد تا اطمینان حاصل شود که پرایمرها تنها توالی هدف از یک پاتوژن خاص را تقویت کردهاند. متناوباً، مشخصه میتواند با برش محصولات تقویت شده با استفاده از آنزیمهای محدود اختصاصی به دنباله هدف تعیین شود. تشخیص دو یا چند پاتوژن در یک واکنش واحد، همانند مالتیپلکس PCR یا PCR ناسازگار، ممکن است با استفاده از LAMP دشوار باشد.
توجه:
- برای دانلود فایل word کامل ترجمه از گزینه افزودن به سبد خرید بالا استفاده فرمایید.
- لینک دانلود فایل بلافاصله پس از خرید بصورت اتوماتیک برای شما ایمیل می گردد.
به منظور سفارش ترجمه تخصصی مقالات خود بر روی کلید زیر کلیک نمایید.
سفارش ترجمه مقاله
نقد و بررسیها
هنوز بررسیای ثبت نشده است.